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¿Crece la levadura en placas de agar LB?

¿Crece la levadura en placas de agar LB?


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Me gustaría cultivar células de E. coli en celofán en la parte superior de la placa LB y luego cultivar células de levadura en la misma placa LB. ¿Crece (o qué tan bien) la levadura en los platos LB? ¿Existe algún medio de composición que pueda ser bueno tanto para E. coli como para levaduras? ¿Alguien ha hecho este experimento?


No muy bien, necesitan dextrosa. Utilice YBT:

20 g Caseína Peptona Tpe-M 10 g Extracto de levadura 20 g Dextrosa 17 g Agar

q.s. a 975 ml en di-agua.

pH a 6.2 w 5M NaOH

q.s. a 1L con agua deshidratada.

Autoclave durante 45 min a 121C

Dispensar asépticamente en placas de Petri.

Almacenar a 4 ° C hasta por 12 semanas.

Si desea cultivar en cocultivo, hágalo en LB complementado con 20g / L Dex.


4.2: Medios de crecimiento de levadura

  • Contribuido por Clare M. O & rsquoConnor
  • Profesor asociado emérito (biología) en Boston College

Para el cultivo de rutina, los científicos suelen utilizar medios enriquecidos que suministran todos los nutrientes que las células necesitan para crecer. Los componentes individuales de Rich Media a menudo no están definidos.Por ejemplo, la levadura se cultiva comúnmente en un medio conocido como YPD, que es simple y económico de preparar. El y ldquoY& rdquo en YPD se refiere a un extracto de levadura, que contiene los compuestos solubles en agua generados cuando la levadura se ve obligada a auto-digerirse. (Aquellos de ustedes que han visitado Australia pueden haber encontrado- tejo extracto de levadura en la propagación popular, Marmite.) El & ldquoPAG& rdquo se refiere a la peptona, una mezcla de péptidos y aminoácidos que se prepara al digerir proteínas animales con proteasas. El & ldquoD& rdquo se refiere a la dextrosa o glucosa, que es la fuente de carbono preferida de la levadura (Sherman, 2002).

Debido a que YPD se compone principalmente de extractos crudos, su composición puede mostrar una variación significativa de un lote a otro. Esta variación rara vez es un problema, porque YPD contiene nutrientes esenciales más que suficientes para satisfacer los requisitos metabólicos de las células. Muchos experimentos, sin embargo, requieren medios con un definido composición. Para satisfacer esta necesidad, la comunidad de la levadura ha desarrollado una variedad de medios sintéticos. Los componentes individuales de los medios sintéticos pueden manipularse para adaptarse a las necesidades de un experimento. (Más adelante en el semestre, usaremos medios definidos para seleccionar genotipos particulares).

La levadura se puede cultivar en cultivos líquidos o en la superficie de placas que contienen medios sólidos. El agar se usa generalmente para solidificar medios de crecimiento líquidos al preparar placas. Las cepas se mantienen típicamente en placas de agar para uso rutinario. Las células crecen en colonias en placas. Las células de una colonia son genéticamente muy similares, si no idénticas, porque derivan de la misma célula progenitora. La mayoría de las cepas de levadura se pueden almacenar en platos en el refrigerador durante varios meses con una mínima pérdida de viabilidad.


Cómo hacer placas de agar LB

  1. Pese 7.5 g de agar, 5 g de triptona, 5 g de cloruro de sodio (NaCl) y 2.5 g de extracto de levadura y agregue a una botella Duran de 1 L.
  2. Mida aproximadamente 400 mL de agua destilada y agregue a la botella de Duran.
  3. Agite la botella para disolver los reactivos.
  4. Una vez que los reactivos se hayan disuelto completamente, ajuste el pH a 7.0 usando una solución de hidróxido de sodio (NaOH) (1 N).
  5. Una vez ajustado el pH, rellene la solución a 500 ml con agua destilada.Opcional: poner un baño de agua a 55 o C.
  6. Para esterilizar, autoclave la solución en un ciclo de líquido (20 min a 15 psi).
  7. Deje que la solución se enfríe a aproximadamente 55 o C, o lo suficientemente caliente como para sostenerla en la mano sin quemarla. Si no tiene tiempo suficiente para controlar la temperatura, coloque la botella en el baño de agua. Esto evitará que la solución fragüe prematuramente.
  8. Cuando se enfríe, agregue el antibiótico apropiado a la solución y agite para mezclar.
  9. Prepare placas de Petri en un ambiente estéril (superficies limpiadas con etanol al 70%, etc.). Vierta con cuidado una capa fina de solución en las placas de Petri para cubrir el fondo de la placa (aproximadamente 10 a 20 ml por placa). Trate de evitar transferir o crear burbujas.
  10. Deje reposar los platos antes de guardarlos en el frigorífico (ver más abajo).

¿Crece la levadura en placas de agar LB? - biología

La levadura tiene necesidades nutricionales simples. Al no poder realizar la fotosíntesis, requieren una fuente de carbono reducida que puede ser un compuesto tan simple como el acetato. Además, también requieren una fuente de nitrógeno como el sulfato de amonio. Las levaduras pueden utilizar una variedad de compuestos nitrogenados orgánicos, incluida la urea y varios aminoácidos. El único otro compuesto complejo que necesitan es la vitamina biotina. Por supuesto, también requieren una variedad de sales y oligoelementos.

Otra característica de la mayoría de las levaduras, incluida la S. cerevisiae, es que se dividen por brotes, en lugar de por fisión binaria (Byers 1981). Un pequeño brote emerge de la superficie de la célula madre y se agranda hasta tener casi el tamaño de la célula madre.

Mientras esto sucede, el cromosomas de la réplica principal. En la mitosis, cuando el núcleo se divide, uno de los núcleos se transfiere a la yema y luego las dos células se separan.

Schizosaccharomyces pombe, otra levadura popular, es notablemente similar a S. cerevisiae, excepto que crece como células cilíndricas que se alargan y se dividen por la mitad por fisión binaria, al igual que las bacterias. Su división celular es tan conveniente de observar que esta levadura también tiene potencial para usarse en la enseñanza de la biología.

El ciclo de vida de la levadura, como el de todos los organismos superiores, incluye un paso conocido como meiosis, donde los pares de cromosomas se separan para dar nuevas combinaciones de rasgos genéticos.

Los ascomicetos, como la levadura de panadería, son populares para la investigación genética porque las ascosporas que producen en cada ascus son productos de la meiosis. Cuando la levadura está estresada nutricionalmente, por ejemplo, por la privación de una fuente de carbono o una fuente de nitrógeno, diploide la levadura esporulará. El núcleo diploide atraviesa mitosis, produciendo cuatro haploide núcleos que luego se incorporan en cuatro ascosporas resistentes al estrés, encapsuladas en el ascus (ver Figura 1). Este empaquetado de los cuatro productos meióticos hace que el análisis genético sea particularmente simple.

La facilidad con la que la levadura de panadería se puede mantener como células haploides o como células diploides es otra característica que las hace atractivas para los genetistas.

¿Para qué sirve la levadura?

La gente ha utilizado levadura, sin duda uno de los primeros organismos domesticados, para la fermentación controlada de alimentos y bebidas y para la levadura en el horneado a lo largo de la historia registrada. Hoy en día, también se utilizan en una variedad de procesos comerciales de fermentación y conversión de biomasa. Su utilidad se basa en su capacidad para convertir azúcares y otras fuentes de carbono en etanol en ausencia de aire (anaeróbico) y en dióxido de carbono y agua en presencia de aire (aeróbico). El etanol es una alternativa valiosa al petróleo como combustible y como materia prima para la fabricación de muchos productos químicos comerciales importantes.

La levadura también es un buen alimento. Es rico en proteínas y es una fuente extraordinariamente buena de vitaminas B. Proporciona una valiosa fuente de nutrientes que son importantes en dietas bajas en carne o vegetarianas. Pero aunque pocas emanaciones de la cocina son tan tentadoras como el aroma a levadura del pan horneado, la mayoría de la gente está de acuerdo en que la levadura pura sabe bastante mal.

Otros géneros de levadura también tienen usos prácticos. Algunos pueden utilizar hidrocarburos, como el petróleo, como fuente de carbono. Estos organismos pueden convertir literalmente el petróleo en proteínas. Se utilizan para eliminar el petróleo como contaminante del medio ambiente y para convertir hidrocarburos de baja calidad en proteínas para el consumo de los animales.

¿Hay algo malo en la levadura?

De hecho, las levaduras pueden ser gérmenes. De hecho, una levadura patógena extremadamente común, Candida albicans, es portado por la mayoría de las personas en forma benigna (Fincham y Day 1971). Mientras que en personas normalmente sanas es inofensivo, en aquellas cuya respuesta inmune está debilitada puede volverse infeccioso y convertirse en un patógeno grave. Estas infecciones son particularmente difíciles de controlar en humanos porque el metabolismo de las levaduras es muy similar al nuestro. Los medicamentos que son tóxicos para la levadura también lo son para las personas. Otra levadura patógena particularmente desagradable, Cryptococcus neoformans, produce una meningitis potencialmente mortal. Estas levaduras se conocen como "patógenos oportunistas" porque son una amenaza grave sólo para las personas con respuestas inmunitarias deterioradas, como las que tienen SIDA.

¿Cómo crece la levadura?

Tanto las células de levadura haploides como las diploides se dividen por gemación (ver Figura 2). El ciclo de división celular comienza con una sola célula sin protuberancia (Pringle y Hartwell 1981 Byers 1981). Esta célula brota, la yema crece casi al tamaño de la célula madre, el núcleo se divide y las dos células se separan en dos células sin brotar. Luego, el ciclo comienza de nuevo para ambas células. El resultado es un aumento exponencial en el número de celdas con un tiempo de duplicación igual al tiempo medio del ciclo de división celular. Esto varía con la cepa, el medio de cultivo y la temperatura, pero puede ser tan breve como una hora. A este ritmo, una sola célula puede convertirse en una colonia apenas visible en un día.

El comportamiento de crecimiento de los cultivos de levadura es similar al de las bacterias. Cuando se inocula un medio de crecimiento, las células requieren un período de preparación antes de comenzar a dividirse. Después de este período de retraso, que puede ser de hasta varias horas, entran rápidamente en la fase exponencial durante la cual su número y masa se duplican a intervalos de tiempo iguales. Después de un período de crecimiento a una tasa exponencial relativamente constante, algunas condiciones ambientales se vuelven limitantes del crecimiento de modo que la tasa de aumento disminuye y el crecimiento finalmente se detiene. La población y la masa se vuelven constantes. El cultivo permanece estacionario y las células permanecen viables durante varias horas. Si el cultivo se refrigera, las células permanecen viables durante meses. Finalmente, las células mueren y, a temperatura ambiente o más cálidas, sufrirán autolisis: sus propias enzimas digestivas se activan y literalmente se digieren a sí mismas, reduciendo sus proteínas y ácidos nucleicos a sus componentes más simples y producen un hedor particularmente desagradable en el proceso.

La levadura normal puede crecer aeróbicamente, en presencia de oxígeno o anaeróbicamente, en ausencia de oxígeno. En condiciones de crecimiento aeróbico, pueden favorecer el crecimiento oxidando fuentes de carbono simples, como etanol, acetato o glicerol. Si tienen el oxígeno adecuado, oxidarán completamente sus fuentes de carbono, generalmente azúcares, a dióxido de carbono y agua. Sin embargo, en condiciones anaeróbicas, privadas de oxígeno, la levadura puede convertir los azúcares solo en dióxido de carbono y etanol, recuperando menos energía. En cualquier caso, el crecimiento estará limitado por algún nutriente esencial o la acumulación de la toxina.

La levadura crece igualmente bien en medios líquidos o en una superficie nutritiva como una placa de agar o una superficie expuesta de algún tipo de alimento. En líquido, deben agitarse o agitarse para que sigan siendo aeróbicos; de lo contrario, se depositan en el fondo del recipiente, consumen el oxígeno disuelto y crecen anaeróbicamente. En una superficie de nutrientes en un recipiente ventilado, crecen aeróbicamente y cada célula forma una colonia visible de hasta 100 millones de células en 2 o 3 días.

El ciclo de vida de la levadura: un ciclo sexual completo

En los organismos sexuales, el ciclo de vida (ver Figura 3) está compuesto por una serie de eventos que se alternan entre un haploide fase y una diploide fase (Fincham & Day 1971). La transición de la fase diploide a la haploide es la consecuencia de una división celular especializada: mitosis - en el que el núcleo se divide dos veces después de una única replicación de los cromosomas. La meiosis produce cuatro núcleos haploides. Durante la meiosis, los cromosomas homólogos emparejados en el núcleo diploide intercambian partes y se distribuyen en los núcleos haploides produciendo nuevas combinaciones de rasgos genéticos. En organismos superiores, una línea de células germinales se diferencia de las células corporales (somáticas). La línea de células germinales produce las células reproductoras que forman el gametos. Los gametos son las células que llevan la información genética a la siguiente generación, mientras que las células somáticas forman el resto del organismo y no juegan un papel directo en la herencia.

La transición de la fase haploide a la diploide resulta del apareamiento (conjugación sexual) entre gametos. Esto conduce a la formación de un cigoto en el que dos núcleos haploides parentales se fusionan para formar un núcleo diploide. En organismos superiores, los gametos son células de línea germinal diferenciadas. En los animales superiores, los individuos del sexo opuesto producen diferentes gametos. Sin embargo, en plantas superiores, son producidos por diferentes estructuras, ya sea en la misma planta o en plantas diferentes.

En la levadura, como en otros microorganismos sexuales, el ciclo sexual completo está presente pero es mucho más simple que en plantas y animales superiores. No se produce una diferenciación permanente entre la línea germinal y las células somáticas. En cambio, las diferenciaciones transitorias ocurren en condiciones apropiadas para facilitar los eventos esenciales. La simplicidad del ciclo sexual en la levadura y la facilidad con la que todos los eventos pueden ser manipulados y observados brindan una oportunidad única para enseñar este proceso normalmente oscuro y abstracto a través de observaciones simples, directas y concretas.

El apareamiento en levaduras mediado por moléculas difusibles (feromonas) puede demostrarse fácilmente (Manney, Duntze y Betz 1981). Cuando se mezclan células de tipo de apareamiento opuesto en la superficie del medio de cultivo de agar en una placa de Petri, los cambios se hacen evidentes en dos o tres horas. A medida que cada tipo de célula secreta su feromona en el medio, responde a la producida por el tipo opuesto (MacKay y Manney 1974). Cada uno responde diferenciando en una forma funcional especializada, un gameto. Las células dejan de dividirse y cambian de forma (ver Figura 1). Se alargan y adquieren forma de pera. Estas células distintivas se han denominado "shmoos" debido a su parecido con los animales míticos pero adorables de la tira cómica "Li'l Abner". Las células de tipos de apareamiento opuestos que están en contacto o muy cerca se unen en la superficie y se fusionan formando una forma característica de "maní" con una constricción central: dos shmoos fusionados en sus extremos pequeños. Los dos núcleos haploides dentro de cada par unido se fusionan en un núcleo diploide, formando un verdadero cigoto. El diploide brota rápidamente en la constricción, formando una figura característica de "hoja de trébol". Se pueden observar fácilmente todas estas etapas bajo el microscopio.

Las feromonas de apareamiento secretadas por las células haploides son pequeñas moléculas de péptidos que se difunden a través del agar (Betz, Manney y Duntze 1981). En consecuencia, su existencia y sus efectos sobre las células de los tipos de apareamiento opuestos son fáciles de demostrar. Si las células del tipo de apareamiento se cultivan durante la noche en medio de agar, se acumula una alta concentración de feromona en el agar que rodea el crecimiento. Entonces, si las células del tipo de apareamiento a se colocan en este agar, comienzan a sufrir la transformación "shmoo" en un par de horas. El efecto es bastante sorprendente. Se puede demostrar el mismo efecto en un medio líquido en el que se han cultivado células de tipo apareamiento. De hecho, cuando se estudiaron las levaduras por primera vez, los biólogos de levaduras utilizaron estos métodos simples para aislar y caracterizar las feromonas.

Shmoos, entonces, son los gametos en la levadura. Se diferencian de las células haploides vegetativas normales solo cuando está presente una célula del tipo de apareamiento opuesto. De manera similar, cualquier célula diploide puede pasar por la meiosis formando haploides que tienen el potencial de convertirse en gametos (Esposito & Klapholz 1981 Fowell 1969b). La meiosis es parte del proceso de esporulación que se inicia cuando las células diploides se transfieren a un medio nutricionalmente desequilibrado. Pero los cambios se hacen evidentes bajo el microscopio solo después de tres a cinco días, cuando los asci se vuelven bastante distintivos. Teóricamente, todos los asci deberían contener cuatro esporas, pero en la práctica, muchos contienen solo dos o tres. El ascus tiene una forma abultada, muy parecida a las naranjas dentro de una bolsa de tela. El tratamiento de la mezcla de esporulación con una preparación cruda fácilmente disponible de enzimas digestivas de caracoles de jardín eliminará la pared del ascus, liberando las esporas. Cuando las esporas, ya sea dentro del ascus o después de ser liberadas, regresan a un ambiente nutricionalmente adecuado, germinan y experimentan un crecimiento vegetativo en una fase haploide estable. Las cepas haploides ocurren en dos tipos de apareamiento, llamados a y (alfa). Dentro de cada ascus, dos esporas son normalmente de tipo apareamiento. a y los otros dos lo son. Cuando una célula de un tipo de apareamiento se encuentra con otro tipo de apareamiento, inician una serie de eventos que conducen a la conjugación. El resultado es una célula diploide, que crece por división celular mitótica en una fase diploide estable. Si simplemente se transfiere un cultivo celular esporulado a un medio de crecimiento, el resultado es una población mixta de cepas haploides y nuevas cepas diploides que son análogas a la progenie de un cruce entre organismos superiores diploides.

Normalmente, los genetistas de levaduras aíslan las esporas, ya sea al azar o por micromanipulación, para evitar que las cepas haploides se apareen y formen la próxima generación. Este grado de control y la capacidad de observar los rasgos genéticos en la fase haploide hace que el análisis genético en levaduras sea poderoso y eficiente. El análisis de poblaciones aleatorias de esporas, aunque requiere mucho tiempo, es lo suficientemente simple para los estudiantes de secundaria y es particularmente adecuado para proyectos individuales para estudiantes avanzados.


DIYeast: Creando platos

De modo que ha adquirido algunas levaduras silvestres e insectos de su patio trasero, sala de frutas o barriles. Tal vez hayas elaborado cerveza con él y ahora tienes tu propia cultura de la casa única. Eso es increíble. Eres una estrella del rock.

Pero, ¿qué tienes realmente? ¿Es levadura salvaje? ¿Es algo funky, como Brett? ¿Es todo lo anterior? ¿Qué es lo que causa esa fermentación agria, si es que lo hace? Los cultivos silvestres mixtos son maravillosos y están lo más cerca que alguna vez llegaremos a replicar las antiguas prácticas de fermentación.

Hasta que no aísle cepas puras individuales, no podrá obtener algún tipo de control sobre sus microbios y reproducir con precisión lotes similares. También aprenderá qué hace que cada variedad funcione, y con qué estilos de cerveza e ingredientes se combinan mejor. Además, una vez que aísle su propia cepa de levadura, todos pensarán que es un niño prodigio.

Antes de continuar, pague Bootleg Biology & # 8217s Kit de herramientas de lucha de levadura para patio trasero. Todo lo que el cervecero casero experimental necesita para capturar insectos silvestres, crear placas de agar y aislar levaduras silvestres.

Star San (ponga un poco en una botella de spray de plástico barata para limpiar su superficie de trabajo)

Placas de Petri de plástico estériles con tapa (las placas de vidrio son reutilizables pero más caras)

Parafilm (la envoltura de plástico estirable es un buen sustituto)

Bunsen o quemador portátil (usar una estufa de gas en su cocina es más barato y casi tan efectivo)

  • Área oscura / cálida para incubar las placas (cuanto más caliente esté, más rápido sabrá si su plato está contaminado)

Luz ultravioleta antimicrobiana (no requerida) 2

Casi todos estos elementos ya están en su cocina o en su kit de herramientas caseras & # 8230, con la excepción de las placas de Petri. Las placas de Petri de plástico son económicas y fáciles de encontrar en Amazon. Por lo general, vienen en diámetros de 60 mm o 100 mm. Si está tratando de aislar microbios de un cultivo mixto como un iniciador de levadura salvaje, probablemente sea mejor optar por el plato de mayor tamaño para aumentar la probabilidad de aislar una cepa.

El agar es una sustancia gelatinosa hecha de algas marinas que cuando se hierve con mosto hace que la mezcla se asiente rápidamente en un medio sólido, gelatinoso, en el que las colonias de microbios individuales pueden crecer y alimentarse.

Creación de una placa de agar simple: 3

  • 300 ml de mosto 1.040 (o menos) (Si usa extracto, hierva el agua y la mezcla de DME antes de agregar otros ingredientes de la receta)
  • 5 gramos de agar agar en polvo (Agregue más si el líquido no se fija)
  • Un poco de nutriente de levadura (Se pueden agregar otras fuentes de aminoácidos debido a su beneficio para el metabolismo de la levadura, pero no se requieren)
  • Por supuesto, también puede omitir la receta y tomar la mezcla de agar de levadura salvaje de Bootleg Biology
  1. Caliente el mosto en una olla pequeña hasta casi hervir y agregue el agar.
  2. Llevar a hervir. El agar y el mosto no se unen con éxito si no se llevan a ebullición.
  3. Deje enfriar durante varios minutos hasta que la temperatura sea baja-100 & # 8217s Fahrenheit o aproximadamente 5-10 minutos. Observe su olla de cerca, ya que el agar puede fraguar muy rápidamente, el medio aún debe ser un líquido espeso cuando se vierte en la placa de Petri.
  4. Vierta una pequeña capa de líquido en la placa de Petri y muévase a su área de almacenamiento sin corrientes de aire. Es importante dejar que el líquido se enfríe antes de cubrirlo con la tapa de la placa de Petri para evitar que se forme condensación en la tapa, lo que ayuda a reducir la probabilidad de crecimiento de moho.
  5. Si se utilizó una buena relación agar / mosto, las placas de agar deberían fraguar en unos pocos minutos. Si encuentra que sus placas no están ajustadas, es posible que deba volver a hervir la mezcla con más agar agregado.
  6. Envuelva los bordes de la tapa del plato con una envoltura de plástico estirable o tiras estiradas de 1/2 pulgada de Parafilm. Esto ayudará a reducir los contaminantes de la placa de agar y evitará que la placa se seque si no la usa poco después.
  7. Deje las placas boca abajo (evita que la condensación caiga sobre el medio de agar) durante un par de días en un lugar cálido y oscuro para incubar. Esto ayudará a determinar qué platos están contaminados con esporas de moho u otros invitados no invitados, haciéndolos inutilizables 2. Cuando haya terminado, guárdelo boca abajo en una bolsa de plástico con cierre y refrigérelo.

Recuerde, no está trabajando en una habitación limpia con campana, obtendrá placas contaminadas. Así que no se entristezca cuando algunas de las placas que ha creado se vean así después de la incubación:

Ahora que ha hecho su propia placa de agar, lo último que debe hacer es Aísle su levadura.


Haciendo Medios

I. Hacer medios de cultivo requiere paciencia y atención a los detalles. Ver video 1: Fabricación de medios microbiológicos

Ver video 1: Fabricación de medios microbiológicos por Bio-Rad. URL: https: //youtu.be/BH4ESgWU_Eo

II. Verter placas de agar. Ver video 2: Preparación de medios sólidos, el video se filmó en los laboratorios de microbiología del estado de Carolina del Norte.

Ver video 1: Preparación de medios sólidos, el video se filmó en los laboratorios de microbiología del estado de Carolina del Norte. URL: https: //youtu.be/P7M_MCXbZjc


LB Agar Lennox (MB38901)

Descripción: Medio recomendado para la prueba de Escherichia coli en estudios de genética molecular. LB Agar Lennox es un medio rico en nutrientes desarrollado por Lennox para el crecimiento y mantenimiento de cultivos puros de cepas recombinantes de E. coli. La triptona aporta nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. El extracto de levadura es fuente de vitaminas, particularmente del grupo B. El cloruro de sodio aporta electrolitos esenciales para el transporte y el equilibrio osmótico. El agar bacteriológico es el agente solidificante. Si lo desea, también se pueden agregar antibióticos.

Instrucciones de uso: Suspenda 35 gramos de medio en 1 L de agua destilada. Mezclar bien y disolver calentando y revolviendo. Hervir durante un minuto hasta que se disuelva por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC durante 15 minutos. Enfriar a 45-50ºC, mezclar bien y verter en platos.

Composición:
& # 8211 Triptona: 10 g / L
& # 8211 Cloruro de sodio: 5 g / L
& # 8211 Extracto de levadura: 5 g / L
& # 8211 Agar bacteriológico: 15 g / L
(PH final 7.0 ± 0.2 a 25 ºC)

Soluble en: agua

Almacenamiento: Conservar a 2-25 ºC. Una vez abierto, mantenga el medio en polvo cerrado para evitar la hidratación. Proteger de la luz y la humedad.


Placa de agar

Un placa de agar es una placa de Petri que contiene un medio de cultivo solidificado con agar, utilizado para el cultivo de microorganismos. A veces, se agregan compuestos selectivos para influir en el crecimiento, como los antibióticos. [1]

placa de agar
UsosCultivo microbiológico
Arte
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Medio de crecimiento

Los microorganismos individuales colocados en la placa se convertirán en colonias individuales, cada una de las cuales será un clon genéticamente idéntico al organismo ancestro individual (excepto por la baja e inevitable tasa de mutación). Por tanto, la placa puede usarse para estimar la concentración de organismos en un cultivo líquido o una dilución adecuada de ese cultivo usando un contador de colonias, o para generar cultivos genéticamente puros a partir de un cultivo mixto de organismos genéticamente diferentes.

Hay varios métodos disponibles para distribuir las células. Una técnica se conoce como "rayado". En esta técnica, una gota del cultivo en el extremo de un lazo de alambre delgado y estéril, a veces conocido como inoculador, se raya a través de la superficie del agar dejando organismos, un número más alto al comienzo de la racha y un número más bajo al final. En algún momento durante una "racha" satisfactoria, el número de organismos depositados será tal que en esa zona crecerán colonias individuales distintas que pueden eliminarse para un cultivo adicional, utilizando otro bucle estéril. Es fundamental trabajar de forma estéril para evitar la contaminación de las placas. [1]

Otra forma de sembrar organismos, además de las rayas, en placas de agar es el análisis de manchas. Este tipo de análisis se usa a menudo para verificar la viabilidad de las células y se realiza con pinners (a menudo también llamados froggers). Una tercera técnica utilizada es el uso de perlas de vidrio estériles para colocar las células en placas. En esta técnica, las células se cultivan en un cultivo líquido del que se pipetea un pequeño volumen en la placa de agar y luego se extiende con las perlas. La placa de réplica es otra técnica para colocar las células en placas de agar. Estas cuatro técnicas son las más comunes, pero también son posibles otras. Es fundamental trabajar de forma estéril para evitar la contaminación en las placas de agar. Por lo tanto, el enchapado se realiza a menudo en una cabina de flujo laminar o en la mesa de trabajo junto a un mechero Bunsen. [2]


Agar de puñalada

Fabricación de puntas de agar para almacenamiento y transporte de cepas bacterianas.

1 litro Componente
10 g Triptona
5 g Extracto de levadura
10 g Cloruro de sodio
6 g Agar

Autoclave. Transfiera a crioviales antes de que se enfríe el medio. Puede almacenar los viales a 4 C durante unos meses.


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