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Tinte celular en espectro de fluorescencia roja

Tinte celular en espectro de fluorescencia roja


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Hay algunos tintes celulares disponibles para stianing células intracelularmente / membrana. Conozco otros canales (CFSE PKH26). Pero quiero teñir las células para la citometría de flujo con un tinte "rojo". He examinado algunas opciones de Thermo pero no encontré datos suficientes sobre ninguna de ellas.

Específicamente, planeo teñir una sola población de células con dos tintes diferentes, tratar cada población teñida de manera algo diferente en el medio, y luego cultivarlas juntas y distinguir las lecturas más tarde. La tinción de anticuerpos para un marcador de superficie sería posible con fragmentos Fab (los propios anticuerpos pueden interferir con la activación celular durante el cultivo). Por lo tanto, preferiría usar un tinte de espectro rojo como CFSE o PKH26, ya que puede ser más barato y posible para un uso secundario con otras líneas celulares.

Tengo varios citómetros disponibles y la emitancia específica no importa, ya que podemos elegir lo que generalmente es posible (LSR / Fortessa).

Por lo tanto, estoy buscando un tinte con emitancia en el espectro de fluorescencia roja que tenga protocolos de tinción disponibles que se puedan adaptar a mis propósitos.

¿Alguien está dispuesto a compartir sus experiencias?

Editar

  • Aclaró que necesitaba una 'tinción sin anticuerpos'
  • Pregunta aclarada con respecto a la cuestión biológica y FACS

He utilizado la marca ThermoFisher de tintes CellTrace. Específicamente, cocultivé dos poblaciones de células, una con CellTrace Far Red en el canal APC y otra con CellTrace Yellow en el canal PE. Mi elección se basó en parte en una revisión de producto de otro laboratorio que promocionaba la citotoxicidad relativamente baja de estos productos.

El protocolo es bastante sencillo. También está disponible en CFSE y Violet, aunque no los he probado. Estos tintes también están optimizados para linfocitos, por lo que recomendaría valorar si está coloreando cualquier otra cosa.

Los tintes son bastante brillante, por lo que hubo problemas con el uso de APC-Cy7, por ejemplo. Terminé dejando mis tintes CellTrace como los únicos marcadores en sus respectivos láseres y apilando mi fenotipado en los láseres de 355 nm y 405 nm.

Como compensación, puede que se quede con las celdas, pero en el manual del producto para CellTrace, sin embargo, dice:

"Los reactivos CellTrace ™ se difunden fácilmente en las células y se unen covalentemente a las aminas intracelulares, lo que da como resultado una tinción fluorescente estable y bien retenida que se puede fijar con fijadores de aldehídos".

Entonces, si usa las perlas de compensación reactivas con amina ArC para kits LIVE / DEAD, es posible que pueda hacer perlas de compensación con ellas. Verificaré esto cuando vuelva al trabajo si es necesario, ya que no lo he hecho yo mismo, ¡pero es una buena idea!


Hay varios tintes diferentes posibles, como puede ver en esta figura (desde aquí):

Se puede encontrar una buena descripción general en la publicación de notas de aplicación "Selección de reactivos para citometría de flujo multicolor" de BD (en la referencia 1) y también en las Especificaciones de fluorocromo de BD (referencia 2).

Referencias:

  1. Selección de reactivos para citometría de flujo multicolor
  2. Especificaciones de fluorocromo de BD Life Sciences


Ver el vídeo: Qué es la fluorescencia y la fosforescencia? (Noviembre 2022).